伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH—SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用

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1.1 药物与试剂 葛根素(纯度>80%,美国Sigma公司,批号039K0256V)。DMEM高糖培养基和胰蛋白酶(美国Gibco BRL公司);胎牛血清(美国Hyclone公司);ROS荧光测定试剂盒(上海杰美基因公司);Lamp2a,Hsc70和β-actin引物(上海生工生物工程公司);Trizol(美国Invitrogen公司);RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit和PCR Master Mix(Fermentas公司);Lamp2a一抗(Abcam公司),Hsc70(Santa Cruz Biotechnology公司)和α-synuclein一抗(Bioworld Technology公司);细胞裂解液(碧云天生物技术研究所);苯甲基磺酰氟(PMSF,美国 Promega公司);ECL增强型化学发光试剂盒(美国Thermo Scientific公司);其他主要试剂均购自美国Sigma公司。

1.2 细胞株 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞株购自中国科学院上海细胞生物学研究所。

1.3 仪器 CO2培养箱、-86 ℃冰箱(日本SANYO公司);DBI6000倒置荧光显微镜(Leica公司);CK2型倒置显微镜(日本Olympus公司);Spectramax M2e多功能酶标仪(美国MD公司);FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson公司);Gel DOC XR凝胶成像分析系统(美国Bio-Rad公司);电泳及转印系统(瑞典Amersham公司);JEM-1230型透射电子显微镜(日本电子公司)。

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