“利肝散”中水飞蓟宾的薄层鉴别

引言：本文利肝散为水飞蓟和绞股蓝等组成的中成药，具有疏肝利胆，清热解毒，具有保肝、利胆、泻下、利尿的功效。本标准对其粉末建立了显微鉴别标准；以水飞蓟宾对照品为对照，建立了薄层鉴别标准。参考《中华人民共和国药典》2010年版一部水飞蓟项下，以水飞蓟宾为对照品建立了薄层鉴别方法。

利肝散为水飞蓟和绞股蓝等组成的中成药，具有疏肝利胆，清热解毒，具有保肝、利胆、泻下、利尿的功效。本标准对以水飞蓟宾对照品为对照，建立了薄层鉴别标准；参考《中华人民共和国药典》2010年版一部水飞蓟项下，以水飞蓟宾为对照品建立了薄层鉴别方法具体如下文。

一、仪器和试药

（一）仪器：

（二）对照品：水飞蓟宾（批号：110856-2011，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供。

（三）试药：各试剂均使用分析纯；聚酰胺薄膜（薄层层析用，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂出品）；薄层硅胶板G（青岛海洋化工厂分厂，批号20140203）；

二、制剂中水飞蓟的薄层鉴别

《中国药典》2010版一部水飞蓟项下收载了水飞蓟薄层鉴别方法。本研究参考药典条件，以硅胶G板为固定相进行制剂中水飞蓟宾薄层色谱研究。研究表明，药典条件下水飞蓟宾薄层斑点显色清晰度较差，且其特征斑点稳定性差，显色后不同时间色谱差异大。鉴于水飞蓟中主要含有黄酮类，本试验采用聚酰胺薄膜作为薄层固定相，预试表明对照品和制剂中主要色谱斑点显色清晰。为此，本研究以聚酰胺薄膜为固定相，从以下几个方面，对制剂中水飞蓟薄层鉴别方法进行了考察。

（一）对照品制备方法：参考《中国药典》2010年版第一部水飞蓟薄层鉴别项下对照品制备方法，制备每1ml含1mg的水飞蓟宾溶液，作为对照品溶液。

（二）供试品液制备方法： 在实验过程中，参考《中国药典》第一部水飞蓟薄层鉴别项下供试品制备方法，表明该方法能有效的提取样品中水飞蓟宾成分。最终确定供试液的制备方法为：取本品粉末1g，加乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣挥尽乙醚，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

（三）显色剂选择：由于水飞蓟宾为一种黄酮类化合物，因此以5%三氯化铝乙醇溶液为显色剂，显色清晰后，在365nm下观察荧光斑点。

（四）展开剂的考察：

分别考察了以下几个系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸；环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇；环己烷-甲酸乙酯-甲酸；甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸，其中比较好的展开剂是①甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（30：13：10：2），因此对此条件进行优化。

（五）展开环境条件的耐用性试验考察：

1.饱和与否考察

对选定的展开剂进行了饱和与否的考察，表明不饱和条件下水飞蓟宾特征斑点有拖尾，因此建议在展开前饱和15分钟（图1）。

2. 利肝散 （批号：20140501） （5µl）

3. 利肝散 （批号：20140502） （5µl）

4. 利肝散 （批号：20140503） （5µl）

5. 利肝散阴性（缺水飞蓟药材）

6. 水飞蓟宾对照品 （2µl）

薄层板：聚酰胺薄膜预制板（100×100mm）

展开剂：甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（30：13：10：2）

展开方式与展距：上行展开9cm；

相对湿度：50%

显色剂：5%三氯化铝乙醇溶液

检视：置365nm紫外灯下检视

2.展开温度考察

对选定的展开剂进行了4℃～8℃（冰箱）、15℃（冷水浴）、25℃（空调室）、35℃（烘箱）的温度考察，结果表明，在温度4～35℃下，均可实现水飞蓟宾斑点的分离，其中以15℃、25℃为其最佳展开温度。（图2）

（六）点样方式和点样量考察

本试验点样方式为条状点样。

本实验对照品点样量为2µl，供试品点样量为5µl，在此条件下，斑点显色清晰，分离度好。

综上所述，本制剂水飞蓟药材薄层鉴别条件为：室温下，在45%～65%湿度条件下，采用条状点样，饱和15分钟后，上行展开10cm。

三、结论与讨论

本制剂对水飞蓟宾薄层色谱研究采用聚酰胺薄膜作为薄层固定相，对照品和制剂中主要色谱斑点显色清晰。对选定的展开剂进行了饱和15分钟，在温度为15～25℃、湿度为45%～65%的相对湿度下分离效果最佳。

参考文献

[1]《中华人民共和国药典》2010年版一部.国家药典委员会.

[2]中药薄层色谱分析技术与应用.中国医药科技出版社.

[3]常用中药薄层色谱鉴定.化学工业出版社.

（作者单位：四川省三星堆制药有限公司）

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