急性期川崎病患儿血浆TSP-1、PAF水平变化及临床意义

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[摘要] 目的 研究急性期川崎病（KD）患兒血浆血小板活化因子（PAF）和血小板反应蛋白-1（TSP-1）水平的变化及临床意义。 方法 选取2015年1月～2018年1月四川大学华西临床医学院（以下简称“我院”）诊治的107例KD患儿为KD组，根据超声心动图表现将其分为冠脉扩张组（n = 43）与无冠脉扩张组（n = 64）;选取我院同期30例拟行腹股沟斜疝的患儿作为对照组。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测KD组急性期、亚急性期、恢复期及对照组血浆TSP-1、PAF、血小板计数（PLT）含量。比较各组不同指标间的差异。 结果 KD组患儿急性期血浆PAF、TSP-1及PLT明显高于对照组（均P < 0.05），KD组血浆PAF、TSP-1水平恢复期、亚急性期、急性期呈升高趋势（均P < 0.05）。冠脉扩张组患儿急性期血浆PAF水平明显高于无冠脉扩张组（P < 0.05），而亚急性期及恢复期血浆PAF水平与无冠脉扩张组比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。冠脉扩张组患儿急性期、亚急性期及恢复期TSP-1水平及PLT与无冠脉扩张组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。KD组患儿急性期血浆TSP-1与PAF、PLT不相关（r = 0.314、0.051，P > 0.05），而PAF与PLT呈显著正相关（r = 0.614，P < 0.05）。 结论 KD急性期血浆PAF、TSP-1明显升高，PAF在冠脉损伤时升高明显，二者参与KD的发生发展，有可能成为早期诊断KD的标志物。

[关键词] 川崎病;急性期;血小板活化因子;血小板反应蛋白-1

[中图分类号] R725.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）07（a）-0113-04

Changes of plasma TSP-1 and PAF level in children with acute Kawasaki disease and their clinical significance

JIANG Yongmei1，2   CHEN Tingting3   ZHOU Kaiyu4   LAI Meimei5

1.West China Hospital of Sichuan University， Sichuan Province， Chengdu   610041， China; 2.Infectious Disease Department， Chengdu Women′s and Children′s Central Hospital， Sichuan Province， Chengdu   610017， China; 3.Department of Cardiology， Chengdu Women′s and Children′s Central Hospital， Sichuan Province， Chengdu   610017， China; 4.Department of Cardiology， West China Women′s and Children′s Hospital， Sichuan Province， Chengdu   610041， China; 5.Department of Laboratory， Chengdu Women′s and Children′s Central Hospital， Sichuan Province， Chengdu   610017， China

[Abstract] Objective To study the changes and clinical significance of plasma platelet activating factor （PAF） and thrombospondin-1 （TSP-1） levels in children with acute Kawasaki disease （KD）. Methods A total of 107 children with KD who were treated in West China Hospital of Sichuan University （"our hospital" for short） from January 2015 to January 2018 were selected as KD group. They were divided into coronary artery expansion group （n = 43） and non-coronary expansion group （n = 64） according to echocardiographic findings. Thirty cases of indirect inguinal hernia in our hospital in the same period were selected as control group. The levels of TSP-1， PAF and platelets（PLT） in the acute， subacute and recovery phases of the KD group and the control group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The differences among different indicators of each group were compared. Results The levels of plasma PAF， TSP-1 and PLT in KD group with the acute phase were significantly higher than those in control group （all P < 0.05）. The plasma levels of PAF and TSP-1 in KD group increased in recovery， subacute and acute stages （all P < 0.05）. The plasma PAF level in coronary artery injury group was significantly higher than that in non-coronary injury group （P < 0.05）， but there was no significant difference in plasma PAF level between KD group in the subacute and recovery phases and non-coronary injury group （P > 0.05）. There was no significant differences in TSP-1 level and PLT count between coronary artery injury group in the acute， subacute， and recovery phase and non-coronary injury group （P > 0.05）. There was no correlation between plasma TSP-1 and PAF， PLT in KD group in the acute phase（r = 0.314， 0.051， P > 0.05）， but there was a significant positive correlation between PAF and PLT （r = 0.614， P < 0.05）. Conclusion The plasma levels of PAF and TSP-1 are significantly increased in the acute phase of KD， and PAF is significantly increased in coronary artery injury. Both PAF and TSP-1 are involved in the occurrence and development of KD， and might be used as markers for early diagnosis of KD.

[Key words] Kawasaki disease; Acute phase; Platelet activating factor; Thrombospondin-1

川崎病（Kawasaki disease，KD）又称为皮肤黏膜淋巴结综合征，多发生于6个月到4岁的儿童，且男性多于女性，近年来，其发病率逐渐增高[1]。KD的主要病理特征是全身非特异性血管炎，血管内皮细胞肿胀坏死，血管内纤维素性血栓形成，血管壁平滑肌细胞水肿分离，并可见大量炎性细胞浸润[2]。KD可并发冠状动脉瘤、冠状动脉狭窄等。早期诊断KD并给予大剂量丙种球蛋白联合阿司匹林治疗，可有效避免或减少冠状动脉损害并发症的发生[3]。但临床上有些患儿临床表现不典型，如不完全性川崎病（iKD），并且目前尚缺乏早期诊断的有效方法，因而有必要进一步研究KD的发生发展机制，寻找早期诊断KD的指标[4-5]。KD急性期患儿血小板产生功能增强，骨髓巨核细胞增生活跃，血小板活化、释放、聚集，最终导致血栓形成[6]。血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是一种脂质递质，不依赖腺苷二磷酸及血栓素A2诱导血小板聚集。血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1，TSP-1）是一种细胞外基质糖蛋白，其具有促进血小板活化和聚集、平滑肌细胞增殖、抑制血管内皮细胞生长等作用[7]。本研究通过检测KD患儿急性期PAF、TSP-1表达情况，初步探讨其在KD急性期诊断的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月～2018年1月四川大学华西临床医学院（以下简称“我院”）诊治的107例KD患儿作为KD组。其中男58例，女49例;年龄6～78个月，平均（22.50±19.21）个月。纳入标准：①符合第10届国际川崎病研讨会制订的KD相关诊断标准[8]，并结合实验室检查确诊;②患儿家属对本研究知情同意并签署知情同意书;③所有患儿均为首次诊治，治疗前均未接受过其他治疗。排除标准：①EB病毒、腺病毒等病毒感染性疾病;②细菌性淋巴结炎、猩红热等细菌感染性疾病;③自身免疫系统疾病;④其他心血管疾病。根据川崎病冠状动脉病变的超声心动图诊断标准[9]，进一步将KD组分为冠脉扩张组（43例）和无冠脉扩张组（64例）。根据病程将KD组分为急性期、亚急性期和恢复期，急性期为丙种球蛋白治疗前、病程的第1～11天、亚急性期为第12～21天、恢复期为第22～60天。以我院同期拟行择期手术的30例腹股沟斜疝患儿作为对照组，男17例，女13例;年龄5～70个月，平均（21.41±13.10）个月。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。本研究经我院医学伦理委员会审核同意。

1.2 检测方法

于急性期治疗前、亚急性期和恢复期采集KD组及对照组患儿晨起空腹静脉血4 mL，置于EDTA抗凝管中，静置30 min后离心10 min，转速3000 r/min，离心半径10 cm，分离出血浆置于-80℃冰箱待检。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患儿血浆TSP-1及PAF，应用逐步解冻法避免血浆产生沉淀，实验步骤严格按照ELISA试剂盒（美国R&D公司，生产批号：20141205）说明书进行。应用自动血细胞分析仪（XE 5000，日本Sysmex公司）测定所有研究对象的血小板计数（PLT）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件進行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，符合正态分布计量资料，两组间比较采用t检验;不符合正态分布计量资料，两组间比较采用Mann-Whitney秩和检验;多组间比较采用单因素方差分析。相关性分析采用Pearson线性相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组PAF、TSP-1及PLT水平比较

KD组急性期血浆PAF、TSP-1及PLT水平明显高于对照组，差异有统计学意义（均P < 0.05）。KD组血浆PAF、TSP-1水平恢复期、亚急性期、急性期呈升高趋势（P < 0.05），而KD组各期PLT比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 冠脉扩张组与无冠脉扩张组TSP-1、PAF及PLT水平比较

冠脉扩张组急性期PAF明显高于无冠脉扩张组（P < 0.01），而冠脉扩张组亚急性期及恢复期的PAF水平与无冠脉扩张组比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。冠脉扩张组急性期、亚急性期及恢复期TSP-1及PLT水平高于无冠脉扩张组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 KD组患儿急性期血浆PAF、TSP-1及PLT之间的相关性分析

相关性分析结果表示，KD组患儿急性期血浆PAF与TSP-1不相关（r = 0.314，P = 0.085），TSP-1与PLT不相关（r = 0.051，P = 0.746），PAF与PLT呈显著正相关（r = 0.614，P = 0.012）。

3 讨论

KD的病因及发病机制尚不清楚，目前认为KD的发生与病原微生物等感染因素引起易感者机体的异常免疫反应有关。病原微生物入侵机体后，单核巨噬细胞活化，提呈抗原，免疫激活T淋巴细胞和B淋巴细胞，进而过度产生趋化因子及细胞因子，损伤血管内皮细胞，导致内皮细胞功能障碍，引起全身血管炎性反应[10]。PAF是一种生物活性磷脂，当单核巨噬细胞、血小板、血管内皮细胞等受到刺激时，可合成PAF。PAF通过结合细胞膜上的G蛋白偶联受体，最终激活蛋白激酶C，发挥生物学效应[11]。本研究KD组患儿急性期血浆PAF、PLT水平明显高于对照组，提示急性期血小板活化程度增强。究其原因，PLT是监测患儿凝血功能状态的常规指标，反映血小板生成与破坏的平衡状态。PAF是一种较强的血小板激活剂，KD患儿血管内皮损伤、免疫活化，导致PAF大量合成及释放，进而促进了血小板活化、聚集、释放[12]，因此KD组患儿PAF、PLT水平上升。本研究进一步分析KD患儿急性期血浆PAF与PLT相关性，发现PAF与PLT呈显著正相关，与既往[13]报道一致，进一步证实了上述结论。本研究冠脉扩张组急性期患者血浆PAF水平明显高于无冠脉扩张组，而在亚急性期及恢复期差异无统计学意义（P > 0.05）。原因可能是KD急性期PAF刺激花生四烯酸、前列腺素和白三烯的释放，并诱导白细胞介素-1（IL-1）、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）基因的表达，促炎介质的大量释放导致血管病变的发生，从而导致冠脉损伤[14]。经丙种球蛋白治疗后机体炎性反应和血管病变的损伤减轻，亚急性期和恢复期血浆PAF逐渐恢复正常水平。

血小板反应蛋白（TSP）家族由五个成员组成，TSP-1～TSP-5，根据其寡聚化结构域和大小分为两组，TSP-1和TSP-2为一组，参与调节心血管炎症和免疫反应，并维持心脏结构的完整性和功能[15]。TSP-1分布于血小板α颗粒中，与受体结合后，起到桥接细胞间、细胞与生长因子、细胞与细胞外基质等作用。TSP-1的遗传多态性与冠状动脉心脏病和心肌梗死有关[16]。然而，目前TSP水平变化及其与KD的关系仍不清楚。本研究KD组患儿急性期血浆TSP-1明显高于对照组，KD组急性期血浆TSP-1明显高于亚急性期和恢复期。KD急性期血浆TSP-1水平升高，其机制可能与TSP-1在炎症局部的免疫抑制作用增强有关。KD急性期血管免疫性损伤的主要始动原因是T细胞异常活化，TSP-1可通过结合T细胞表面受体CD47或抗原提呈细胞表面的受体，干扰细胞信号传导，进而发挥免疫抑制作用[17]。急性期KD患者血小板活化后，释放内容物明显增多，即使在予以丙种球蛋白治疗后，血小板活化程度仍较高，因而在亚急性期血浆TSP-1水平仍维持较高水平，恢复期逐渐降至正常水平。寻找反映KD患者冠脉损伤及损伤严重程度的标志物是近年来研究的重点和热点，如血清中N端脑钠肽前体、二甲基精氨酸及半乳糖凝集素-3等與KD患者冠脉损伤有关[18-23]。本研究冠脉扩张组急性期、亚急性期及恢复期TSP-1及PLT水平高于无冠脉扩张组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。提示血浆TSP-1水平是否适用于KD并发冠脉损伤的诊断指标还需进一步研究。

综上所述，KD患儿急性期血浆PAF、TSP-1明显升高，PAF在冠脉损伤时明显升高，二者可能与血小板相互作用，共同参与KD发生发展的病理生理过程。

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