检查为原发性肝癌。排除标准：①合并其他部位肿瘤;②不稳定的系统性疾病;③未控制的感染。
1.3主要试剂 UbcH10特异的兔抗体抗体、免疫组化通用二抗试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司;Harris苏木素购自中国北京中衫金桥公司;DAB显色液试剂盒、柠檬酸盐缓冲液均购自北京中杉金桥有限公司。
1.4方法 在取得组织样本后在液氮中快速冷冻，并在手术后于-80℃下储存以进行免疫组化分析。通过免疫组织化学检测肝癌组织中的UbcH10蛋白表达。免疫组化染色采用链霉卵白素-辣根过氧化物酶（sp）法。石蜡包埋，3 μm厚的组织切片，将切片脱石蜡并使用乙醇溶液脱水。终止内源过氧化物酶活性后在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中漂洗后，在柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）中处理，然后将切片在室温下冷却。第一抗体是对UbcH10特异的兔抗体（1∶15，Atlas Antibodies，Sigma-Aldrich，USA）。将切片与一抗孵育过夜4℃，然后使用二抗，用二氨基联苯胺显示结果。实验结果通过显微镜计数阳性细胞百分比判定，在光学显微镜下每张切片随机连续计数5个视野（×400）内阳性细胞个数。具体判断标准：组织完全不着色或阳性细胞数不足5%为阴性（-）;组织阳性细胞数为5%～25%为阳性（+）;阳性细胞数>25%～50%为中阳性（++）;阳性细胞数占50%以上为强阳性（+++），视为UbcH10高表达。
1.5统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用？字2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1肝癌组织中UbcH10的表达 有93.33%（28/30）的肝癌组织中显示UbcH10表达，仅有6.67%（2/30）的正常肝组织显示UbcH10表达，肝癌组织中UbcH10表达高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P<0.05）;其中高分化肝癌组织UbcH10表达低于低分化肝癌组织，差异有统计学意义（P<0.05），见图1。
2.2肝癌UbcH10表达与临床病理特征关系 不同年龄、性别患者中UbcH10表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤大小、组织学分化程度、淋巴结是否转移患者中UbcH10表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
3讨论
癌症的发生发展是一个由多种基因参与的、多步骤、多阶段的病理过程。其中可能涉及多种原癌基因的异常激活，抑癌基因作用减弱或者失活。这些病理改变可能使正常细胞的增殖失控，最终导致细胞癌变。肝癌做为一种常见的恶性肿瘤，原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素的复杂过程，受环境和饮食双重因素影响。早期肝癌常症状无特异性，中晚期肝癌的症状则较多，常见的临床表现为肝区疼痛、纳差、腹胀、消瘦，乏力、进行性肝大或上腹部包块等;部分患者有低热、腹泻、黄疸、上消化道出血;且肝癌破裂后出现急腹症表现等，也有症状不明显或仅表现为转移灶的症状。肿瘤标志物指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生物合成、释放或者是宿主对癌类反应性的一类物质。
白酶体系统（UPS），介导泛素-蛋细胞内泛素化的蛋白质经蛋白酶体降解，是调节细胞内蛋白稳态的重要途径。当泛素-蛋白酶体通路对肿瘤相关因子的降解功能发生异常时，可能引起癌基因蛋白异常增高、抑癌基因蛋白异常降解、肿瘤细胞凋亡通路受抑制或增殖活化，而参与肿瘤的发生发展。UbcH10作为泛素结合酶家族的成员，参与细胞周期关键调节分子的泛素依赖性蛋白水解过程，被认为是癌症进展中的关键因素。韩少山等[4]研究表明，UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关，其可能成为潜在的分子标注或治疗靶点。UbcH10过度表达可引起肿瘤细胞多种指标的改变[5，6]，抑制其表达可降低癌细胞的恶性程度。多项研究表明，UbcH10在乳腺癌[7]、卵巢癌[8]、淋巴瘤[9]、胃癌[10]、胰腺导管癌[11]、脑胶质瘤[12]、结肠癌[13]等多种肿瘤中呈高表达并且与肿瘤分期呈正相关，提示不良预后[14-16]。
本研究结果显示，有93.33%（28/30）的肝癌组织中显示UbcH10表达，仅有6.67%（2/30）的正常肝组织显示UbcH10表达，肝癌组织中UbcH10表达高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P<0.05）;其中高分化肝癌组织UbcH10表达低于低分化肝癌组织，差异有统计学意义（P<0.05）。不同年龄、性别患者中UbcH10表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤大小、组织学分化程度、淋巴结是否转移患者中UbcH10表达比较，差异有统计学意义（P<0.05）。说明肝癌组织中存在UbcH10过度表达，可能与肿瘤发生发展过程密切相关。另有研究表明[17]，干扰UbcH10基因表达可显著抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖活性并增加细胞凋亡。Treffers EE等[18]研究表明，UbcH10基因过表达小鼠在接触致癌药物后有更高的癌症发病率，并且UbcH10基因过表达小鼠在生长过程有自然形成肿瘤的倾向。
综上所述，UbcH10在肝癌患者肝组织中过度表达，并与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移相关。UbcH10可作为肝癌患者肿瘤治疗的预后标志物和潜在分子靶点。
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收稿日期：2019-3-26;修回日期：2019-4-30
編辑/杜帆
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