对照组。A组患者年龄在46～62岁，平均（58.6±6.2）岁；病程1～5年，平均（3.5±0.4）年；B组患者年龄在45～65岁，平均（57.9±5.6）岁；病程1～5年，平均（3.2±0.5）年；对照组年龄在40～70岁，平均（59.6±7.3）岁。三组研究对象年龄的比较上无明显差异，存在可比性。
1.2细胞株和试剂
雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞、雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞均由中科院细胞库提供。LNCaP细胞在F12培养基（10%胎牛血清）中进行增殖培养传代，PC-3细胞在RPMI 1640培养基（10%胎牛血清）中进行增殖培养传代。培养时温度均为37℃，二氧化碳5%。
1.3方法
ANG在正常前列腺细胞和前列腺癌细胞系的表达：（1）人前列腺细胞系PC-3M和前列腺癌细胞系LNCaP购自中科院细胞库，按相关文献报道培养，LNCaP在激素递减环境下经连续传代形成激素非依赖的LNCaP-AI细胞系；（2）提取各组细胞总RNA，real-time PCR检测各组ANG mRNA含量；（3）提取细胞总蛋白，western-blot检测各组ANG蛋白含量。RNA干扰ANG合成后观察细胞生物学变化：（1）设计ANG靶向siRNA，以脂质体为载体转染LNCaP和LNCaP-AI细胞系，同时设计空白载体组；（2）稳定转染后，观察各组细胞形态变化；（3）用CCK-8法、自动酶标仪测定每孔的光密度（D）值比较转染前后各组细胞生长曲线变化；（4）以标准方法采用流式细胞仪检测转染前后各组细胞周期；（5）用Transwell小室和0.25% 考马斯亮蓝染色、正置显微镜进行计数观察转染前后各组细胞侵袭力。
1.4统计学分析检验方法
实验数据录入SPSS14.0专业统计学软件完成分析检验，计量时数据录入形式为（±s），完成t检验，计数时数据录入形式为%，完成χ2检验，当P<0.05时，统计学差异具有显著意义。
2结果
2.1ANG表达结果分析
与对照组相比，A组和B组患者ANG蛋白（+）信号表现为棕黄色颗粒，位于胞浆部位。64例前列腺癌患者中ANG蛋白呈（+）56例，占87.50%，与对照组的0.00%比较，χ2=156.36，P<0.05，统计学差异显著；强度主要集中在中等或强阳性。癌旁组织中ANG蛋白主要存在于血管平滑肌细胞、内皮细胞、少量的炎性细胞等，均呈弱阳性。
2.2ANG检测阳性表达比较
A组和B组患者ANG均为不同程度的阳性表达，但不同分期中A组阳性表达低于B组，P<0.05，统计学差异显著。见表1。
3讨论
前列腺癌患者血清ANG水平高于正常人水平，并且在前列腺癌组织中高表达ANG[6]。本研究中，A组与B组患者ANG阳性表达率明显高于对照组（P<0.05），提示前列腺癌患者ANG阳性表达出现异常。国内有研究表明ANG在前列腺癌组织中表达显著高于前列腺良性增生组织，ANG的表达随前列腺癌患者临床分期的升高而上调。由于多种因素诱发前列腺组织内的ANG异常合成增加进而促进腺体内血管增生、内皮细胞迁移粘附很可能是推进前列腺癌进展的关键因素之一[7，8]。我们推测，在雄激素促进前列腺癌发生发展的同时，ANG很可能也发挥着作用。尤其是进行去势治疗后，体内雄激素水平下降，在癌细胞逐渐发展为雄激素非依赖性的过程中，ANG的表达可能会明显增加成为主要的促肿瘤因素，最终使激素依赖性前列腺癌（ADPC）演变为激素非依赖性前列腺癌（AIPC）。
研究结果中：A组（雄激素依赖性前列腺癌）患者ANG蛋白水平在A、B、C、D四个分期的表达中均低于B组（雄激素非依赖性前列腺癌），统计学差异显著（P<0.05）；雄激素依赖性前列腺癌向非依赖性发展时，ANG水平明显发生变化，提示ANG在病情的发生发展中具有一定作用。ANG是1985年Fett等首次从培养的人结肠腺癌细胞株HT-29的无血清上清液中分离到的，ANG具有核糖核酸酶的活性，这是是其促血管生成功能所必需的[9]。ANG蛋白含123个氨基酸，相对分子量为14.4kD，虽然在肿瘤细胞中首先发现，但也存在于人体正常细胞中，可由多种组织和细胞分泌，在生理状态下其表达受到严格的调控。ANG是一种非常有效的促血管生成因子，可对血管的内皮细胞及平滑肌细胞产生很强的促增殖作用。目前ANG在很多缺血性疾病（胎盘缺血、心肌缺血等）的诊断与治疗中体现出一定价值[10]。ANG与肿瘤关系密切。肿瘤性血管内皮细胞膜上存在ANG 高度特异性的整合素作为 ANG 受体介导内皮细胞的增殖粘附和迁移，并且ANG结合于肿瘤细胞及内皮细胞的表面或细胞外基质，起到连接两种细胞的作用。在多种恶性肿瘤患者中ANG在肿瘤组织中的表达和血清ANG水平均明显升高，ANG且与肿瘤进展有关，提示预后较差或复发，如胰腺癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、胃癌、肝细胞癌、浸润性宫颈癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和急性髓性白血病等[11]。癌变的发生、发展、浸润以及转移等对血管新生有显著的依赖性。癌细胞分泌的各类因子对血管内皮细胞产生作用，促进其增殖，在宿主内生成新的血管网，为瘤体的生长提供营养。ANG家族在其受体Tie-2的作用下对新生成的血管产生作用，并维持其稳定性。ANG-1因子具有内皮细胞趋化作用，同时能够增加其生存时间。ANG-2与ANG-1具有拮抗作用，均受其Tie-2受体的调控与其具有一致的亲和力。但临床对ANG参与血管的新生机制尚未明确。大部分学者研究认为：ANG-1结合受体后促进磷酸化的发生，借助细胞和基质间的作用对血管结构进行调控，稳定血管结构；而ANG-2与ANG-1发生竞争抑制性作用，阻断血管内皮细胞与外周细胞的作用，对血管的重塑产生抑制，导致血管结构不稳定，松解血管增强VEGF的促血管新生作用，生成新的毛细血管[12，13]。林楠等学者对动物进行实验发现[14]：肝移植瘤中肿瘤的形成时ANG-2表达过度，说明ANG与肿瘤新生血管的生长具有相关性，可促进其生长；本文研究与其结果相近，说明ANG在前列腺癌病情发展的机制中具有重要作用。
综上，由于多种因素诱发前列腺组织内的ANG异常合成增加进而促进腺体内血管增生、内皮细胞迁移粘附很可能是推进前列腺癌进展的关键因素之一[15]。我们推测，在雄激素促进前列腺癌发生发展的同时，ANG很可能也发挥着作用。尤其是进行去势治疗后，体内雄激素水平下降，在癌细胞逐渐发展为雄激素非依赖性的过程中，ANG的表达可能会明显增加成为主要的促肿瘤因素，最终使激素依赖性前列腺癌演变为激素非依赖性前列腺癌。研究在该演变过程中前列腺癌细胞内ANG的表达变化对了解激素非依赖性前列腺癌的形成机制有重要意义。
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