食管鳞癌组织中HIF—1α及Fascin蛋白的表达

对照，病理学检查排除肿瘤累及。手术前所有病例均未行放化疗，所有标本均经病理确诊为食管鳞癌。所有标本均经10%福尔马林液固定；常规石蜡包埋、切片（厚度4 μm）；并进行HE染色和免疫组织化学检测。

1.2 免疫组化染色 试验用小鼠抗人Fascin单克隆抗体及SP即用型试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。兔抗人HIF-1α多克隆抗体购自Boster公司。应用免疫组织化学SP方法，检测HIF-1α及Fascin蛋白在食管鳞癌中的表达。严格按试剂盒上要求的步骤操作，用已确诊的食管癌组织切片作阳性对照，用PBS液代替一抗作阴性对照。

1.3 染色结果及判断标准

1.3.1 HIF-1α蛋白染色判定 阳性表达为肿瘤细胞内出现棕黄色颗粒。HIF-1α定位于细胞核或细胞浆内；据阳性肿瘤细胞数占肿瘤细胞总数的比例分为：HIF-1α阳性细胞数<1%定义为阴性（-），在1%～10%之间定义为弱阳性（+），在11%～50%之间定义为中度阳性（++），>50%定义为强阳性（+++），其中（+～+++）均视为阳性表达。

1.3.2 Fascin蛋白染色判定 依据胞膜和胞浆中显示弥漫性棕黄色颗粒为阳性染色，每张切片随机计数10个高倍视野， 每个视野计数100个细胞。据阳性细胞百分率来判定：（1）未见棕黄色颗粒为阴性；（2）<25% 为弱阳性（+）；（3）在25%～75%之间为阳性（++）；（4）>75%为强阳性（+++），其中（+～+++）视为阳性表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS 22.0软件处理数据，计数资料的比较采用 字2检验，相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HIF-1α和 Fascin蛋白在食管鳞癌和癌旁正常组织中的表达 HIF-1α和 Fascin蛋白在食管鳞癌组织的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织中的阳性表达率，差异均有统计学意义（P<0.01），见表1。

2.2 HIF-1α和Fascin的表达与食管鳞癌临床病理因素的关系 HIF-1α及Fascin的表达均与食管鳞癌患者的性别、年龄无明显相关性（P>0.05）；HIF-1α及Fascin的表达均与食管鳞癌患者的组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关（P<0.05），见表2。

2.3 HIF-1α、Fascin在食管鳞癌中表达的相关性分析 食管鳞癌组织中HIF-1α、Fascin均为阳性表达者50例，均为阴性表达者8例，分析显示两者的表达呈正相关（r=0.252，P<0.05），见表3。

3 讨论

3.1 缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Fascin蛋白表达与食管鳞癌生物学行为的关系 相对缺氧趋势是实质性肿瘤微环境的重要改变，但肿瘤对微环境缺氧存在自我调节与适应，其主要受HIF-1α介导的缺氧反应通路的调节，主要功能涉及微血管生成、细胞生存、糖代谢、细胞侵袭转移等多个方面[4]。孙巧妹等[5]应用免疫组织化学方法检测HIF-1α在正常唾液腺组织、多形性腺瘤、唾液腺腺样囊性癌中表达时发现三者阳性表达率依次递增，且组间比较差异有统计学意义，提示HIF-1α可以作为判断唾液腺腺样囊性癌 诊断、侵袭、转移及预后的重要指标。Semenza等[6]报道提示在实体肿瘤组织中HIF-1α表达上调，且其表达程度与肿瘤的病理学分级、血供存在相关性。Dales等[7]研究发现HIF-1α在乳腺癌中的表达与其转移有关，且HIF-1α高表达患者有生存率较低。Jean等[8]报道提示HIF-1α表达的高低与乳腺癌的分期、进展程度以及患者的预后相关。周红艳等[9]通过原位杂交技术检测102例宫颈鳞癌组织、66例CIN 组织和40例正常宫颈组织中HIF-2α mRNA的表达时发现HIF-2α mRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率均显著高于正常宫颈组织和CIN组织，且HIF-2αmRNA 在宫颈鳞癌组织中的阳性表达与淋巴结转移和临床分期相关。提示HIF-2α mRNA在宫颈鳞癌组织中表达上调，可能与宫颈鳞癌的发生和演进有关。Matsuyama等[10]研究发现在215例食管鳞癌组织中HIF-1α阳性表达率达为95%，进一步研究发现HIF-1α与食管鳞癌血管生成和淋巴结转移相关；本研究提示80例食管鳞癌组织中HIF-1α的阳性表达率高于癌旁正常食管组织（P<0.05）；进一步研究发现食管鳞癌中HIF-1α表达与食管癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈正相关（P<0.05）；提示HIF-1α可作为反映食管癌恶性程度及分期的指标。本研究与Munipalle等[11]的研究结论一致。

Fascin是20世纪70年代由Bryan 等[12]从海胆卵母细胞胞质中发现的。人类Fascin基因定位于染色体7q22，分子质量为55 ku，为一种细胞骨架蛋白。其主要作为细胞与细胞、细胞与细胞外基质黏附受体以及影响上皮细胞的转移能力[13]；在细胞迁移、黏附以及细胞间信息传递等过程中发挥重要作用[14]。徐光[15]研究发现鼻咽癌组织中Fascin阳性表达率为92.05%显著高于癌旁正常组织9.09%；姜英等[16]用免疫组化方法检测乳腺增生、乳腺原位癌及乳腺浸润性导管癌中Fascin蛋白表达，结果显示：Fascin蛋白在高度乳腺导管原位癌中阳性表达率为11.1%（2/18），在乳腺浸润性导管癌组中阳性表达率为15%（18/120）。提示在乳腺增生到乳腺癌的发生、发展过程中，Fascin蛋白表达可能是一个迟发事件，主要在癌组织中表达，有可能成为乳腺癌治疗的一个新的生物学标志物。李晟等[17]采用免疫组织化学法检测108例胃癌组织中Fascin表达，结果Fascin表达率为25.00%，进一步研究提示：Fascin的表达在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，两组比较差异有统计学意义（P<0.05），远处转移组高于无远处转移组，两组比较差异有统计学意义（P<0.01），提示Fascin蛋白阳性表达与肿瘤的转移有关。Tsai等[18]采用免疫组化的方法统计了100例肾癌手术标本，发现Fasein与肿瘤分期呈正相关，且在肿瘤的侵袭、转移和复发过程中发挥作用。安锦丹[19]等研究发现：卵巢恶性上皮性肿瘤组织中Fascin的阳性表达率高于卵巢交界性上皮性肿瘤组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织的表达，比较差异有统计学意义（P<0.01）。进一步分析发现Fascin的阳性表达与卵巢恶性上皮性肿瘤患者临床分期、淋巴结转移、腹水显著相关（P<0.05），提示卵巢恶性上皮性肿瘤组织中Fascin阳性表达升高；其阳性表达可能与卵巢恶性上皮性肿瘤的浸润、转移有关。本研究显示80例食管鳞癌组织中Fascin的阳性表达率达72.5%，明显高于癌旁正常食管组织的表达（P<0.05）；进一步分析发现食管鳞癌中Fascin表达与食管癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈正相关（P<0.05），结合文献及本研究结果推测，Fascin与F-肌动蛋白结合，使细胞膜表面突起增多，从而改变细胞骨架、细胞与细胞、细胞与细胞外基质的黏附等因素而促进食管鳞癌细胞转移。

3.2 HIF-1α和Fascin蛋白表达的关系 食管癌是一个多因素、多阶段、多基因变异积累及相互作用的复杂的过程。本研究中，食管鳞癌组织中HIF-1α及Fascin均表达阳性者50例，均表达阴性者8例，Pearson相关分析显示两者的表达呈正相关（r=0.252，P<0.05）。提示在食管鳞癌的发生发展过程中HIF-1α和Fascin存在协同作用。

参考文献

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（收稿日期：2016-01-18） （本文编辑：蔡元元）

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