HPLC法检测建泽泻中23—乙酰泽泻醇B含量

摘要 〔目的〕建立中药材建泽泻中23-乙酰泽泻醇B的提取及检测体系。〔方法〕采用石油醚超声处理，辅助旋转蒸发提取23-乙酰泽泻醇B，利用高效液相色谱法检测；色谱柱：Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：室温；流动相：乙腈-水（80∶20）；流速：0.8 mL/min，检测波长：208 nm。〔结果〕建泽泻中23-乙酰泽泻醇B在25～500 μg/mL的线性关系良好；平均回收率为98.1%，RSD为3.10%。〔结论〕该方法简便、准确、重复性好，适用于微量建泽泻的检测。

关键词 建泽泻；HPLC；23-乙酰泽泻醇B；检测

中图分类号 O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）07-0293-02

Determination of Alisol B 23-acetate in Rhizoma Alismatis by HPLC

LI Qing 1 ZHOU Yi-fei 1 BAI Ze-fang 1 LIU Yin-yan 2 PAN Da-ren 3 *

（1 College of Crop Science，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou Fujian 350002； 2 College of Rural Development，

Fujian Agriculture and Forestry University； 3 College of Life Science，Fujian Agriculture and Forestry University）

Abstract 〔Objective〕 To establish a method for extraction and determination of alisol B 23-acetate in Rhizoma Alismatis.〔Methods〕Extraction alisol B 23-acetate by following steps：ultrasonic extraction with petroleum ether，condensation of the extraction liquid by rotary evaporator，and determination by HPLC. Chromatographic column was Waters C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），column temperature was room temperature，mobile phase was acetonitrile-water（80∶20），the rate flow was 0.8 mL/min，and the detection wavelength was 208 nm.〔Results〕The calibration curves showed good linearity in the range of 25 μg/mL to 500 μg/mL of alisol B 23-acetate in Rhizoma Alismatis；the average recovery of alisol B 23-acetate was 98.1%，and the relative standard deviation was 3.10%.〔Conclusion〕This method is reliable，simple and precise. It could be used for the detection of Rhizoma Alismatis.

Key words Rhizoma Alismatis；HPLC；alisol B 23-acetate；detection

泽泻是一种常见的中药材，是由泽泻科（Alismataceae）多年生植物泽泻（Alisma orientale（Samuels）Juzep.）块茎干燥炮制而成。泽泻性味甘淡寒，归肾、膀胱经，具有利水渗湿、泄热和化浊降脂的功效，用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛和高血脂等[1]。现代药理研究，泽泻的主要化学成分为三萜类物质，其中最主要的药用成分为23-乙酰泽泻醇B[2]。

泽泻主要产于福建、江西、四川、云南、贵州等地，其中产于福建和江西的被称为“建泽泻”，产于四川、云南、贵州的被称为“川泽泻”，市场上普遍认为建泽泻的品质更好[3]。本试验以建泽泻为材料，优化建泽泻中23-乙酰泽泻醇B的提取方法，应用高效液相色谱法（HPLC）测定建泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量，该方法简便、可靠、重现性好，可以为建泽泻的质量评价提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 试材与准备。本试验于2013年7月至2014年1月在福建农林大学田间试验室中进行。供试建泽泻种子为本试验室保存。建泽泻种子于7月8日播种育苗，苗期40 d， 8月18日移栽至大田，大田前作为水稻。选择成熟的建泽泻，分别采收叶片、块茎和根须，在烘干箱中经60 ℃干燥至恒重。干燥后的材料用FY 135中草药粉碎机粉碎，过60目筛子，备用。

1.1.2 试剂。乙腈为色谱纯（德国Merck公司），水为市售娃哈哈纯净水，标准样品23-乙酰泽泻醇B购于国家标准物质信息中心，无水乙醇、石油醚、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等药品均为国产分析纯。

1.1.3 仪器。烘干箱（上海精宏）、FY 135中草药粉碎机、BS 124S型电子天平、3200 IH型超声波清洗器、UV 1700-1800紫外可见分光光度计（上海凤凰光学科技有限公司）、美国Waters 2695高效液相色谱仪、Waters 2996检测器。

1.2 试验方法

1.2.1 标准样品溶液的制备。精密称取标准样品23-乙酰泽泻醇B 4 mg，置于5 mL的离心管中，用移液枪精密移取4 mL色谱乙腈，短暂超声混匀，制成1 mg/mL的标准样品储备液。用0.22 μm滤头过滤备用。

1.2.2 色谱条件。色谱柱为Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温为室温；流动相为乙腈-水（80∶20）；流速为0.8 mL/min，检测波长为208 nm；进样量为20 μL[4]。

1.2.3 检测波长的选择。称取标准样品23-乙酰泽泻醇B适量，加适量色谱乙腈稀释，作为对照品溶液，以色谱乙腈作为参比溶液，用紫外可见分光光度计在200～400 nm波长范围内扫描。根据最大吸收值确定适宜波长。

1.2.4 提取溶剂的选择。精密称取建泽泻块茎粉末4份，每份0.3 g，分别加入不同的提取溶剂（甲醇，丙酮，石油醚，乙酸乙酯）20 mL，溶液超声处理（功率200 W，频率40 kHz）30 min，滤纸过滤。滤液经旋转蒸发仪蒸干，加入1 mL色谱乙腈溶解蒸干的样品，溶液用0.22 μm滤头过滤，进样。肉眼观察提取结果，选择适宜的提取溶剂。

1.2.5 提取时间的确定。精密称取建泽泻块茎粉末4份，每份0.3 g，根据1.2.4结果添加提取溶剂20 mL，分别溶液超声处理（功率200 W，频率40 kHz）10、20、30、40 min，滤纸过滤。滤液经旋转蒸发仪蒸干，加入色谱乙腈1 mL溶解蒸干的样品，溶液用0.22 μm滤头过滤，进样。根据检测结果选择适宜的提取时间。

1.2.6 提取次数的确定。精密称取建泽泻块茎粉末3份，每份0.3 g，根据1.2.4结果添加提取溶剂20 mL进行反应，超声处理（功率200 W，频率40 kHz，30 min），分别超声处理1、2、3次，滤纸过滤。滤液经旋转蒸发仪蒸干，加入1 mL色谱乙腈溶解蒸干的样品，溶液用0.22 μm滤头过滤，进样。根据检测结果选择适宜的提取次数。

1.2.7 线性关系考察。用移液枪精密移取上述标准样品23-乙酰泽泻醇B储备液25 、50、100、200、300、400、500 μL到2 mL离心管中，加入色谱乙腈定容至1 mL，短暂超声混匀，0.22 μm滤头过滤，制成25、50、100、200、300、400、500 μg/mL浓度的标准样品。按色谱条件，每个浓度进样20 μL，重复进样3次，取峰面积的平均值。以标准样品浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标制作标准曲线，考察其线性关系。

1.2.8 精密度试验。精密吸取配浓度为300 μg/mL的23-乙酰泽泻醇B标准品溶液，重复进样6次，每次进样体积为20 μL，通过检测结果判断仪器的精密度。

1.2.9 重复性试验。精密称取同一批的建泽泻粉末6份，依照上述方法制备供试溶液，进样检测，判断该方法的重复性。

1.2.10 稳定性试验。精密称取建泽泻粉末0.3 g，依照上述方法制备供试溶液，分别在1、2、4、8、12 h进样检测，验证其稳定性。

1.2.11 加样回收率试验。精密称取建泽泻块茎粉末6份，每份0.3 g，其中3份加入浓度为300 μg/mL的23-乙酰泽泻醇B标准品溶液0.2 mL，3份不加，依照上述方法制备供试溶液，进样检测，测定其加样回收率。

1.2.12 建泽泻含量的检测。分别精密称取建泽泻叶、块茎、根须粉末各3份，每份0.3 g，依照上述方法制备供试溶液，进样检测[5]。

2 结果与分析

2.1 检测条件分析

按照上述方法进行试验，23-乙酰泽泻醇B标准样品和建泽泻样品的HPLC色谱图分别见图1和图2。

紫外可见分光光度计在200～400 nm波长范围内扫描结果表明，标准样品23-乙酰泽泻醇B在208 nm处有最大吸收值，因此选择208 nm作为23-乙酰泽泻醇B的检测波长。根据1.2.4的方法，通过肉眼对提取结果进行观察，石油醚提取液颜色较浅，较透明。进样结果表明以石油醚为提取溶液的提取率较高，杂质少，目标峰清晰，且杂峰少。综合肉眼观察和进样结果，选取石油醚作为提取溶剂[6]。不同超声处理次数溶液检测结果表明，溶液超声处理（功率200 W，频率40 kHz，30 min）提取1次，提取率可达到95%，基本已提取完全。以标准样品浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标制作标准曲线（图3），23-乙酰泽泻醇B的标准曲线为：Y=253 27X-486 65，相关系数R2=0.999 6，线性范围25～500 μg/mL。

300 μg/mL的23-乙酰泽泻醇B标准品溶液重复进样6次，测得峰面积的RSD为1.70%，结果表明该仪器的精密度良好。对同一批的建泽泻粉末6份进行检测，结果表明23-乙酰泽泻醇B峰面积的RSD为1.74%，说明该方法重复性较好。对建泽泻粉末在1～12 h进样检测，结果表明23-乙酰泽泻醇B峰面积的RSD为0.93%，说明提取12 h内稳定性较好。加样回收率试验结果表明，平均回收率为98.1%，RSD为3.10%。

2.2 建泽泻中23-乙酰泽泻醇B含量检测结果

依照上述方法制备供试溶液并进样检测，建泽泻不同部位23-乙酰泽泻醇B含量检测结果如表1所示。

3 结论与讨论

建泽泻的主要药用成分23-乙酰泽泻醇B为四环三萜类物质，易溶于甲醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，本试验选择甲醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯为提取溶剂进行提取试验，结果表明石油醚为最佳提取试剂。同时优化提取步骤，优化后的（下转第299页）

（上接第294页）

步骤为石油醚超声处理30 min提取，滤纸过滤，滤液经旋转蒸发仪蒸干，加入1 mL色谱乙腈溶解蒸干的样品，溶液用0.22 μm滤头过滤。该方法适用于微量的样品的提取，提取效果好、提取产物纯度高、杂质少、操作简单快捷。本试验采用HPLC法建立了23-乙酰泽泻醇B的标准曲线，同时测得建泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量，检测结果理想，可以为以后建泽泻的检测及质量评价提供理论依据及方法。

23-乙酰泽泻醇B广泛地存在于建泽泻的各个部位，其中块茎中的含量最高，叶片次之，根须中含量最低。但目前市场上的建泽泻只是利用块茎，对叶片的利用很少见，严重的浪费了建泽泻资源[7]。建泽泻叶片中也含有较大量的23-乙酰泽泻醇B，值得进一步的研究开发利用。

4 参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：212-213.

[2] 朱玉岚，彭国平.泽泻的萜类化学成分研究进展[J].天然产物研究与开发，2006，18（2）：348-351.

[3] 徐昭玺.中草药种植技术指南[M].北京：中国农业出版社，2000：282-287.

[4] 蒋铁伦，韩超，邱招钗，等.液相色谱指纹图谱在泽泻动态研究中的应用[J].分析试验室，2006，25（3）：70-73.

[5] 陈建忠，潘馨，黄若旺.HPLC法同时测定泽泻中2有效成分的含量[J].药物分析杂志，2007，27（5）：721-723.

[6] 王立新，吴启南，彭国平.泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量测定研究[J].南京中医药大学学报：自然科学版，2002，18（2）：105-107.

[7] 陈丽，吴水生，郭素华，等.建泽泻中泽泻醇B-23-乙酸酯含量的HPLC测定[J].福建中医学院学报，2004（5）：30-33.

推荐访问： 泽泻 乙酰 含量 检测 HPLC