新乡市待宰猪弓形虫感染的血清学调查与分析

摘要 为了解猪弓形虫的感染情况,随机采集新乡市某屠宰场的待宰猪血液50份,通过弓形虫间接血凝试验检测其抗体水平。结果表明,弓形虫抗体效价在1∶64以上的有7头,阳性率为14%,可为弓形虫病的防治提供理论依据。

关键词 待宰猪;弓形虫;正向间接血凝试验;血清学调查

中图分类号 S858.28;R531.8 文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)18-0294-01

弓形虫病是由刚地弓形虫寄生在人、畜、禽的肺、淋巴结、肝、脾、脑及其他组织细胞内引起的一种急性、热性原虫病,是一种人和多种动物共患的寄生虫病[1]。人或动物通过摄入被刚地弓形虫卵囊污染的食物或水源,或通过摄食含包囊的肉而被感染。在美国,猪肉是被认为引起人感染弓形虫病的主要传染源[2]。弓形虫病对人类健康危害极大,可造成孕妇流产、死胎、畸形儿、弱智儿等一系列围产期疾患,同时它也是神经系统和眼科疾患的主要病原之一[1]。因此该病给人类健康和畜牧业发展带来极大危害和威胁。为了解新乡市待宰猪弓形虫的感染情况,通过弓形虫正向间接血凝试验(IHA),进行弓形虫感染的血清学调查。

1材料和方法

1.1试验材料

样品来自新乡市某屠宰场的待检猪,随机采集血液50份;弓形虫间接血凝抗原、阴性血清、阳性血清及稀释液,购自中国农科院兰州兽医研究所。试验器材:微量移液器,96孔“V”型微量反应板,微型振荡机,生化培养箱,电热恒温水浴锅。

1.2试验方法

1.2.1诊断抗原的预处理。按冻干抗原瓶签所标毫升数用灭菌蒸馏水稀释摇匀,放入灭菌离心管中,1 500~2 000 r/min离心10 min,弃去上清液,加等量稀释液摇匀,之后置于4 ℃冰箱中放置24 h,作为诊断液使用。稀释后的诊断液要在10 d内用完,否则弃用。

1.2.2血清分离。将血样置于37 ℃生化培养箱中1 h,之后置4 ℃冰箱,自然析出血清,将血清抽出装入小离心管中,于56 ℃水浴锅中灭活30 min,4 ℃保存备用。

1.2.3加稀释液。反应在96孔“V”型微量反应板上进行,每块血凝板设待检血清、阳性血清、阴性血清和稀释液对照孔。用移液器加稀释液于96孔“V”型微量反应板上,每孔75μL。稀释液于阳性、阴性血清对照孔各加8孔,被检血清孔各加4孔。

1.2.4稀释。在第1孔加阳性血清、阴性血清和待检血清各25 μL,混匀,稀释,用移液器移取25 μL置于相应第2孔内,按此法依次往后稀释,稀释到第7孔或第3孔,最后弃去25 μL,每孔内的液体量为75 μL。每排的最后一孔为稀释液对照孔。

1.2.5加诊断液。每孔加25 μL诊断液,加完后将反应板置于微型振荡器上,振荡1~2 min,直到诊断液中的血球分布均匀。取下反应板,盖上一张与反应板大小相等的干净纸,以防止灰尘落入。置于37 ℃下作用2~3 h,判定结果。

1.2.6结果判定。以50%红细胞凝集(++)的最高稀释倍数判定为该血清的凝集价(效价)。在阳性对照血清滴度不低于1:1024(第5孔“++”),阴性对照孔血清除第1孔允许存在前滞现象(+)外,其余各孔及稀释液对照孔均为“-”的前提下,对待检血清进行判定。血清抗体效价≥1∶64者判为阳性;效价≤1∶64者判为阴性。最后统计阳性率。

2结果与分析

由表1可以看出,在50份待宰猪被检血清样品中,弓形体抗体的阳性数为7份,阳性率为14%。此结果较1989年河南省人畜弓形虫病调查协作组[3]对武涉县调查的猪弓形虫抗体阳性率(49.41%)、1992年杜重波等[4]对发生猪流产的甘肃省高台县种猪场调查的弓形虫抗体阳性率(41.5%)和1996年毕运龙等[5]对云南省53个县调查的猪弓形虫抗体阳性率(26.4%)低;与1998年张德林等[6]对甘肃省天祝县调查的猪弓形虫抗体阳性率(13.8%)、2006年王天奇等[7]对洛阳地区部分规模化猪场调查的弓形虫抗体总阳性率(16.5%)和育肥猪的阳性率(11.3%)接近。说明猪弓形虫的感染率目前趋于平稳,猪群感染率与样品采集的对象、时期、地区,以及饲养管理状况和猪健康状况等因素有关。

3结论与讨论

3.1猪场感染弓形虫的原因与对策

屠宰场的待宰猪来自新乡市的养猪专业户或散养户,饲养方式为圈养,饲喂配合饲料,这种饲养方式在一定程度上限制了猪弓形虫的感染和传播。待宰猪的弓形虫抗体阳性率为14%,说明新乡市猪群依然存在弓形虫的感染,可能与目前猪场老鼠成灾、猪场养猫灭鼠和农村流浪猫增多等因素有关。建议相关部门设立流浪猫收容所,对流浪猫进行收容、去势和领养等工作。猪场禁止养猫,加强饲料保管,严防被猫粪污染,同时做好灭鼠工作。新乡市城郊有饲喂泔水的猪,主要销往外地,所采样品并没有涉及。

3.2弓形虫感染检测方法的选择

用弓形虫正向间接血凝试验检测人或动物弓形虫感染(下转第296页)

(上接第294页)

的循环抗体,在感染后12 d左右即可检出,并且循环抗体可在1~2年内维持较高水平[4],IHA法具有简便、快捷、特异、对试验条件要求不高等特点,适合弓形虫感染的流行病学调查。2007年王艳华等[8]研制的弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条,其灵敏度明显高于IHA法,适用于弓形虫病的早期检测和诊断,具有巨大的临床应用前景。1992年杜重波等[4]研制的抗弓形虫单克隆抗体反向间接血凝诊断试剂(MCAb-RIHA)和1989年傅翠娥等[9]建立的ELISA双单克隆抗体夹心法可检测血清弓形虫循环抗原,具有诊断弓形虫急性或活动性感染的价值,可以用于弓形虫病早期诊断、流产病因学调查和流行病学调查。

3.3避免弓形虫的职业感染

弓形虫的滋养体会通过口、鼻、咽、呼吸道粘膜、眼结膜和皮肤侵入各种动物和人的体内[10]。弓形虫病具有一定职业分布特点,动物饲养员、屠宰工人、肉类加工工人及弓形虫病实验室等人群易于感染[11]。兽医、动物饲养员、屠宰工人、肉类出售和加工人员在工作时,应戴防护性手套和口罩,以免感染,并定期测定弓形虫抗体水平。1%来苏儿溶液1 min内能杀死滋养体[10],可用其对污染的环境和器械进行消毒。

4参考文献

[1] 吕晓星.人畜共患病的防治(7)弓形虫病[J].湖南农业,1996(8):22.

[2] STEUR B E,ALLATRE S D,MAGGIE,W L,et al.猪病学[M].8版.赵德明,张中秋,沈建忠,等译.北京:中国农业大学出版社,2000:681-685.

[3] 河南省人畜弓形虫病调查协作组.武涉县人畜弓形虫病的血清学调查[J].河南农业科学,1989(10):31-32.

[4] 杜重波,金兆庆,郭志刚,等.应用弓形虫McAb-RIHA对甘肃省羊猪血清弓形虫循环抗原的检测[J].中国兽医科技,1992,22(11):8-10.

[5] 毕运龙,张应国,胡金凤,等.云南家畜弓形虫感染的血清学调查[J].云南畜牧兽医,1996(1):15-16.

[6] 张德林,李惠萍,杜重波,等.天祝县人畜弓形虫病流行病学调查[J].甘肃畜牧兽医,1998,28(4):20-21.

[7] 王天奇,董发明,潘耀谦,等.洛阳地区猪弓形虫病血清学调查与分析[J].湖北畜牧兽医,2006(9):29-30.

[8] 王艳华,李克生,才学鹏,等.弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制[J].中国兽医科学,2007,37(1):29-32.

[9] 傅翠娥,陈彩华,蒋柏鸣,等.ELISA双单克隆抗体夹心法检测弓形虫循环抗原的实验研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1989,7(3):191-193.

[10] 北京农业大学.家畜寄生虫学[M].北京:中国农业出版社,1981:430-435.

[11] 吕元聪.中国弓形虫病流行病学研究近况[J].广西医学,2002,24(1):48-51.

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